在90年代早期，就已經(jīng)發(fā)現(xiàn)實時熒光定量PCR儀，但是當(dāng)時的技術(shù)比較落后，給后來的PCR儀起到了的兩個關(guān)鍵的作用是：
1、實時熒光定量PCR儀的核酸外切酶活性的發(fā)現(xiàn)，能降解特異性熒光記探針，因此使得間接的檢測PCR產(chǎn)物成為可能。
2、實時熒光定量PCR儀使在一密閉的反應(yīng)管中能實時地監(jiān)測反應(yīng)全過程。這兩個發(fā)現(xiàn)的結(jié)合以及相應(yīng)的儀器和試劑的商品化發(fā)展的導(dǎo)致在研究工作中的運用。
現(xiàn)在，PCR儀隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加，zui終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)方式生成模板，從而進入平臺期。因此可以在PCR反應(yīng)處于指數(shù)期的某一點 上來檢測PCR產(chǎn)物的量，并且由此來推斷模板zui初的含量。每個反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號達到設(shè)定的域值時所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)。研究表明，每個模板的域值循環(huán)數(shù)值與該模板的起始拷貝數(shù)的 對數(shù)存在線性關(guān)系，起始拷貝數(shù)越多，域值循環(huán)數(shù)值越小。
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