ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性，酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。在測定時，受檢標(biāo)本（測定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體，也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)呈色的深淺進行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果，使測定方法達到很高的敏感度。ELISA可用于測定抗原，也可用于測定抗體。然而，影響Elisa試驗結(jié)果的因素很多，故加強各個環(huán)節(jié)的質(zhì)量保證才能充分發(fā)揮其方法學(xué)的優(yōu)點。
1.洗板
①保證洗液注滿各孔，洗板針疏通，洗完板后在吸水紙（選擇潔凈、無或少塵的吸水材料）上輕輕拍干；
②合理安排，或多用幾臺洗板機。
2.讀板
應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔，在整個操作過程中保證酶標(biāo)板不觸摸次氯酸；盡可能完結(jié)ELISA檢測標(biāo)準(zhǔn)自動化，有用前進檢測質(zhì)量。
3.加樣
?、贅?biāo)本為血清：將血液先天然寄存1-2小時后，再用3000rmp離心15分鐘；標(biāo)本為血漿：有必要運用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管，采血后有必要當(dāng)即倒置采血管混合5-10次，放置一段時間后，3000rpm離心15分鐘；若在幾天內(nèi)檢測，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
?、诩訕雍蠹皶r放入孵箱。
?、奂用冈噭┖笥梦堅诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。
④如果選用AT或其他全自動加樣，選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
?、輼?biāo)本較多時，請分批操作。
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